今天,Biotechniques網站介紹了2014年在該網站發表的5篇有趣和有用的PCR方法相關文章
。
PCR是現代分子生物學中的一種基本技術
,所以它的任何創新或改進都受到研究人員的極大歡迎
。BioTechniques的編輯們一直都非常喜歡PCR方法
,致富彩票很高興看到
,2014年帶來了新技術的強大選擇
。在這裏
,致富彩票介紹了在過去一年中發表的5篇PCR方法相關論文
,範圍很廣
,從基本老式PCR反應有效性和特異性的改進
,到尖端技術如數字PCR
。
1
、 一種強大的耐熱DNA聚合酶鏈置換活性可顯著改善DNA擴增結果
誰不喜歡一種多功能的工具呢
?當你可以用有些奇怪但很方便
、孩子喜歡的叉勺時
,為什麽還去用勺子和叉子呢
?在8月刊的BioTechniques
,Ignatov等人描述了DNA聚合酶的叉勺等價物
,一種可用於常規PCR反應以及等溫擴增的DNA聚合酶
。直到現在
,這兩種擴增方法還需要非常不同類型的DNA聚合酶
:對於PCR來說
,一種耐熱DNA聚合酶(如Taq酶)
,可以經受住每一個PCR循環中的熱變性步驟
;對於等溫擴增來說
,一種DNA聚合酶如Bst
,具有很強的鏈置換活性
,使DNA鏈分開而代替熱變性
。Ignatov和同事們證明
,一種新型Taq DNA聚合酶突變體
,具有很強的鏈置換活性
,稱為SD DNA聚合酶
,不僅可用於PCR和環介導等溫擴增法(LAMP)以及近描述的聚合酶鏈置換反應方法
,而且能夠改善靈敏度和效率
,即使在困難的情況下
,例如長片段PCR或GC富集模板的擴增
。這種多用途的新型DNA聚合酶應該是對DNA擴增酶工具箱的一種受歡迎的補充
。
2、 牛凝血酶可提高聚合酶鏈式反應的效率和特異性
當PCR不能正常工作
,或產生非特異性擴增產物和引物二聚體而不是預期的擴增子時
,這是非常令人沮喪的
。多年來
,研究人員已經在PCR反應中添加了許多化合物
,以提高DNA擴增的特異性和效率
。這些添加物範圍很廣
,從小的有機分子(例如甘油和甜菜堿)到非離子型洗滌劑(如Triton X-100和Tween
,到蛋白質如BSA)
。不幸的是,每一種添加物隻在一組特定的條件下改善PCR擴增結果
。真正理想的狀態是
,一種PCR增強劑在盡可能多的不同情況下都可以起作用
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